Приготовить 3 раствор карболовой кислоты 200 мл

Кислота карболовая 5 % (Acidum carbolicum 5 %)

Состав и форма выпуска. Препарат содержит карболовую кислоту (фенол). Прозрачная бесцветная жидкость своеобразного запаха. Хорошо растворяется в маслах, растворителях жиров и воде. Флаконы по 0,2 — 1 л.

Фармакологическое действие. Карболовая кислота (фенол) обладает сильным антисептическим, бактерицидным и противопаразитарным свойством. В основе антисептического действия препарата лежит обезвоживание, свертывание и осаждение белка протоплазмы клеток и их гибель. Механизм бактерицидного и противопаразитарного действия довольно сложный. Легко растворяясь в липоидах, фенол останавливает процессы всасывания и выделения у микробов, блокирует ферментную активность дегидраз, нарушает образование липопротеидов и синтез белков в микробных клетках и паразитах, бактерицидная сила карболовой кислоты характеризуется следующими параметрами: 0,5 — 1 % растворы задерживают гниение, препятствуют развитию микроорганизмов; в 2 % концентрации в течение 5 -10 минут прекращает рост почти всех вегетативных форм микроорганизмов (сибиреязвенная палочка, возбудитель рожи свиней, вирус ящура); 2 — 3 % растворы — гноеродные микробы; 5 % раствор — туберкулезные палочки.

Карболовая кислота ядовита для вшей и клещей: 2 -3 % растворы убивают чесоточных клещей через 2—10 минут, 5% раствор — через 1 — 2 минуты. Бактерицидность, вирулицидность, инсектицидность и акарицидность растворов фенола значительно возрастает с повышением температуры, а также в присутствии какой-либо одноосновной соли (NaCl) или кислоты (НО). При контакте с раневой поверхностью фенольные растворы понижают чувствительность нервных окончаний. При кратковременном воздействии это влияние не оставляет следа, а при длительном (более часа) ведет к дегенерации нервов, которая бывает выражена тем сильнее, чем выше концентрация и чем длиннее экспозиция воздействия. Фенольные растворы подавляют грануляционные процессы, поэтому их можно использовать для промывания ран, для длительного лечения применять их нецелесообразно. Фенол хорошо всасывается слизистыми оболочками, хуже кожей. Помимо местного он оказывает и резорбтивное токсическое действие, и прежде всего на центральную нервную систему.

Показания. Дезинфекция животноводческих помещений, предметов ухода за жи-потными, сточных ям, отстойных колодцев, навозохранилищ. Для обеззараживания спецодежды, белья, резиновых и кожаных изделий, инструментов, кетгута, кожи животных перед прививками. Также назначают карболовую кислоту как прижигающее средство при разращениях кожи и новообразованиях. Используют для консервации лекарственных препаратов, патологоанатомического материала.

Дозы и способ применения. Препарат применяют наружно в виде 3 % или 5 % раствора для дезинфекции животноводческих помещений, предметов ухода, инструментов, одежды и т. п., а также для обеззараживания кожи животных перед инъекцией. Для дезинфекции можно готовить мыльно-карболовый раствор. Карболовую кислоту (3 — 5 %) иногда используют для дезинсекции (дезинвазии), для чего готовят фенольно-керосиновые, фенольно-скипидарные и другие смеси. Для консервирования лекарственных средств, сывороток, вакцин и патологического материала используют 0,1 — 0,5 % растворы.

Побочные действия. Кислота карболовая концентрацией более 2,5 % раздражает ткани, может всосаться через неповрежденную кожу и вызвать отравление животного. Карболовая кислота после резорбции оказывает на животных в основном неблагоприятное действие. В больших дозах она вызывает угнетение, параличи, коматозное состояние, ослабление резистентности, тяжелые осложнения и смерть от паралича дыхательного центра. От очень больших доз карболовой кислоты смерть может наступить в течение нескольких минут.

Противопоказания. Нельзя использовать препарат на кошках, продуктивных животных, а также перед убоем и на больших поверхностях тела животного. Запрещается применять для обеззараживания помещений, предназначенных для хранения и переработки мяса и молока.

Особые указания. Остатки фенола в мясе и молоке создают стойкий неприятный запах и вредны для здоровья людей. Появление мочи темного цвета является первым признаком наступающего отравления карболовой кислотой. В этом случае требуется немедленно прекратить ее применение. При отравлении необходимо промыть желудок, затем ввести внутрь известковую воду с сахаром, жженую магнезию или глауберову соль и применить симптоматические средства.

Условия хранения. Список Б. В хорошо закрытой таре в сухом, защищенном от света месте при температуре от 0 до 20 °С. Срок годности 1 год.

Производитель. Витаминная станция, Россия.

Источник

Как приготовить рабочий раствор дезинфицирующего средства

Самый частый вопрос, который покупатели задают в чат поддержки нашего интернет-магазина — как правильно приготовить рабочий раствор дезинфицирующего средства. С этим вопросом обычно обращаются рядовые потребители, поэтому будет уместным собрать всю информацию по данному вопросу в один обзор.

Для начала хотелось бы обратить Ваше внимание на следующее: Всегда строго следуйте инструкции к дезинфицирующему средству!

В инструкции указываются те требования к приготовлению рабочих растворов дезинфицирующих средств, которые производитель посчитал важными для конкретного дезсредства.

Производители дезсредств придерживаются некоторых общих правил, которые справедливы для приготовления рабочих растворов практических всех дезинфицирующих средств. Например:

• Посуда для должна быть химически нейтральна, чистой, без следов ржавчины. Обычно это эмалированная посуда (без повреждения эмали), стеклянные или пластмассовые ёмкости
• Для приготовления обычно используют чистую холодную питьевую воду. Если производитель требует дистиллированную воду, то это будет обязательно указано в инструкции к раствору для дезинфекций.
• Некоторые препараты, могут быть использованы не только в виде водного раствора, но в виде водно-спиртового. Для приготовления таких дезсредств используют не 2 компонента, а 3.
• К работе не допускаются лица моложе 18 лет и не страдающие аллергическими заболеваниями и повышенной чувствительностью к химическим веществам.
• При работе со средством кожу рук необходимо защищать резиновыми перчатками.
• Мерная посуда должна быть чистой, сухой и химически нейтральной. Весьма желательно пользоваться раздельной посудой для каждого компонента рабочего раствора.
• При всех работах следует избегать попадания средства в глаза и на кожу.

Ключевое понятие для приготовления рабочего раствора дезинфицирующего средства — концентрация, которая подразумевает долю дезсредства в общем объеме рабочего раствора. Обратите внимание, что обычно концентрация дезсредства для разных режимов обработки и разных обрабатываемых поверхностей отличаются, порой — существенно. Концентрация — понятие относительное и поэтому справедливо для любого дезинфицирующего средства, то есть 1%-ный рабочий раствор препарата Альфадез, Миродез или любого иного означает, что в составе присутствует 1/100 часть дезинфицирующего средства и 99/100 частей воды.

Ниже приведена универсальная таблица для приготовления рабочих растворов для дезинфекции в диапазоне 0,1% — 4%. Иные концентрации можно высчитать из данных таблица по правилам обычной пропорции.

Концентрация рабочих растворов дезинфицирующих средств

Концентрация рабочего раствора (%) по препарату

Количество концентрата средства и воды (мл), необходимые для приготовления:

Источник

Карболовая кислота

Фармакологическое действие

Карболовая кислота — антисептический препарат. Обладает бактерицидной активностью в отношении вегетативных форм бактерий (преимущественно аэробных) и грибов, на споры влияет слабо; оказывает дезинфицирующее действие. Взаимодействует с белками микробной клетки и вызывает их денатурацию, нарушает коллоидное состояние клетки, растворяется в липидах клеточной мембраны и повышает её проницаемость, воздействует на окислительно-восстановительные процессы. В 1,25 % растворе большинство микроорганизмов погибает через 5–10 минут при комнатной температуре. На кожу и слизистые оболочки оказывает раздражающее и прижигающее действие. Бактерицидный эффект усиливается в кислой среде и растёт с повышением температуры.

Фармакокинетика

Легко всасывается с кожи и слизистых оболочек (при системной абсорбции оказывает токсическое действие), 20 % окисляется, выводится с мочой.

Показания

Дезинфекция предметов домашнего и больничного обихода, инструментов, белья, выделений; дезинсекция; консервирование лекарственных средств, сывороток, свечей; поверхностные пиодермии (остиофолликулит, фолликулит, сикоз, фликтена, стрептококковое импетиго); воспалительные заболевания среднего уха; кондиломы генитальные.

Противопоказания

• Повышенная чувствительность к карболовой кислоте (фенолу);
• распространённые поражения кожи и слизистых оболочек;
• детский возраст;
• беременность;
• период лактации (грудное вскармливание).

Беременность и грудное вскармливание

Применение при беременности

Адекватных и строго контролируемых исследований по безопасности применения карболовой кислоты при беременности не проведено.

Применение в период грудного вскармливания

Специальных исследований по безопасности применения карболовой кислоты в период грудного вскармливания не проведено.

Способ применения и дозы

Наружно в виде 2 % мази: при гнойных заболеваниях кожи после удаления гноя и некротических масс мазь тонким слоем наносят на ограниченные поражённые участки кожи 1–2 раза в день.

При остром неперфоративном гнойном среднем отите (в составе комплексной терапии): 5 % раствор карболовой кислоты (фенола) в глицерине закапывают по 8–10 капель в тёплом виде в слуховой проход на 10 минут (затем удаляют при помощи ваты) 2 раза в сутки в течение 3–4 дней (при отсутствии положительной динамики через 4 дня производят парацентез).

Генитальные остроконечные кондиломы: обрабатывают раствором, состоящим из 60 % карболовой кислоты и 40 % трикрезола, с интервалом в 1 неделю.

В фармацевтической практике для консервирования лекарственных средств, сывороток, свечей используют 0,5–0,1 % растворы.

Для дезинфекции помещений (стены, окна, двери) — мыльно-фенольный раствор (обладает дезинфицирующим моющим свойствами), нагретый до 50–80 °C. Состав: 2 % зелёного мыла + 3–5 % карболовой кислоты + 93–95 % воды. Для приготовления 5 % мыльно-фенольного раствора на 1 ведро берут 300 г зелёного мыла и 550 г жидкого фенола.

Для дезинфекции белья используют 1–2 % мыльно-фенольные растворы (100–200 г жидкого фенола на 1 ведро воды); бельё замачивают и выдерживают в течение 2 часов.

Для дезинсекции применяют фенольно-керосиновые, фенольно-скипидарные смеси.

Побочные действия

Зуд, жжение, раздражение кожи в месте аппликации, аллергические реакции.

Передозировка

При попадании больших количеств на кожу

Жжение, гиперемия, анестезия поражённого участка.

Лечение

Обработка кожи тампоном с растительным маслом или полиэтиленгликолем, (нельзя использовать вазелиновое масло), симптоматическая терапия.

При поступлении внутрь

Ожог слизистых оболочек, боль во рту, глотке, животе, рвота бурыми массами, бледность кожных покровов, головокружение, миоз, понижение температуры тела, потеря сознания, кома, судороги, бурая и быстро темнеющая на воздухе моча, острая почечная недостаточность. Смертельная доза — 2 г.

Лечение

Промывание желудка растительным маслом с белком, затем 10 % раствором глицерина с активированным углём, магния оксидом и кальция глюконатом, назначение активированного угля, форсированный диурез, введение натрия тиосульфата (100 мл 30 % раствора внутривенно капельно), витаминов B₁ и B₆, лечение токсического шока.

Меры предосторожности

Нельзя обрабатывать обширные участки тела.

Рекомендуется предварительно механически очистить сильнозагрязнённые обеззараживаемые предметы, поскольку фенол адсорбирует органические соединения и при этом снижается его бактерицидная активность.

Обеззараживаемые предметы длительное время сохраняют запах карболовой кислоты.

Не применяют для дезинфекции помещений, используемых для приготовления и хранения пищевых продуктов и кухонной посуды.

Не портит ткани, не меняет их окраску.

При нанесении на поверхности, покрытые лаком, вызывает их изменение.

Источник

Приготовить 3 раствор карболовой кислоты 200 мл

Для того чтобы увидеть четкие контуры микроорганизмов, применяют метод биологического окрашивания. Специальные методы окраски позволяют выявить морфологию и структуру микробных клеток. В микробиологии используют различные красители, которые разделяются по их способности окрашивать определенные структурные образования микробных клеток.

1. Основные (или ядерные) — избирательно окрашивают ядро и базофильные структуры бактериальных клеток, очевидно, из-за кислой среды ядерного вещества: нейтральный красный, фуксин основной, кристаллический фиолетовый, гематоксилин, малахитовый зеленый, метиленовый зеленый, везувин, хризоидин, индулин и др.

2. Кислые (или цитоплазматические) — окрашивают преимущественно цитоплазму, реже клеточные стенки: фуксин кислый, эозин, эритрозин, конго, пикриновая кислота, нигрозин (индийские чернила) и др.

3. Нейтральные — избирательно окрашивают отдельные компоненты цитоплазмы: судан III, нильский синий и др.

4. Флюорохромы — группа красителей, способных флюоресцировать при той или иной длине волны возбуждающего света: ауромин, корифосфин, примулин, акридиновый оранжевый и др.

СОСТАВ И ПРИГОТОВЛЕНИЕ КРАСИТЕЛЕЙ ДЛЯ ОКРАШИВАНИЯ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ПРЕПАРАТОВ

Приготовление насыщенных спиртовых растворов красителей. Порошки в количествах, необходимых для приготовления каждого красителя, высыпают во флаконы, заливают 96% этиловым спиртом и ставят на 18-24 ч в термостат при 37°С, периодически взбалтывая. В течение указанного времени значительная часть красителя растворяется, и на дне флакона остается небольшой осадок, свидетельствующий о насыщении раствора. Насыщенные растворы могут храниться долгое время во флаконах из темного стекла.

Приготовление спиртово-водных растворов красителей. Спиртово-водные растворы красителей готовят из насыщенных спиртовых растворов. Для этого насыщенный спиртовой раствор красителя смешивают в различных соотношения, (в зависимости от красителя) с дистиллированной водой.

Кристаллический фиолетовый

A. Кристаллический фиолетовый — насыщенный спиртовой раствор.

Кристаллический фиолетовый — 10 г.

Спирт этиловый 96% — 100 мл.

Вместо кристаллического фиолетового можно пользоваться генциановым фиолетовым или метиловым фиолетовым.

Б. Кристаллический фиолетовый — спиртово-водный раствор.

1 мл насыщенного спиртового раствора разбавляют 10 мл дистиллированной воды.

B. Кристаллический фиолетовый — карболовый раствор.

Кристаллический фиолетовый — 1 г.

Карболовая кислота кристаллическая -2 г.

Спирт этиловый 96% — 10 мл.

Вода дистиллированная — 100 мл.

Карболовый раствор кристаллического генцианового или метилового фиолетового готовят аналогично первой прописи карболового раствора фуксина Циля (описано ниже) или смешивают 10 мл насыщенного спиртового раствора краски со 100 мл карболовой кислоты. Полученную смесь тщательно взбалтывают и фильтруют через бумажный фильтр. Растворы кристаллического метилового, генцианового фиолетового нестойки, готовить их в большом количестве на длительное хранение не рекомендуется.

Г. Кристаллический фиолетовый ацетат.

Кристаллический фиолетовый (насыщенный раствор) — 0,25 мл.

Уксусная кислота 5% — 100 мл.

Приготовленную смесь тщательно взбалтывают и фильтруют через бумажный фильтр. Вместо кристаллического фиолетового можно использовать насыщенный раствор метилового фиолетового. Краситель нестойкий, хранится не более месяца во флаконе темного стекла.

Фуксин

А. Фуксин — насыщенный спиртовый раствор.

Основной фуксин — 8-9 г.

Спирт этиловый 96% — 100 мл.

Б. Фуксин — спиртово-водный раствор.

1 мл насыщенного спиртового раствора фуксина разбавляют 10 мл дистиллированной воды.

В. Карболовый фуксин Циля ( Ziehl , 1882).

Основной фуксин — 1 г.

Спирт этиловый 96% — 10 мл.

Карболовая кислота кристаллическая — 5 г.

Глицерин — 0,5 мл.

Вода дистиллированная — 100 мл.

Вариант 1. 1 г основного кристаллического фуксина растереть в фарфоровой ступке с 5 г кристаллической карболовой кислоты и несколькими каплями глицерина. Во время растирания небольшими порциями прибавить спирт. После того как краситель хорошо разотрется, приливают при постоянном помешивании небольшими порциями 100 мл дистиллированной воды. Раствор красителя фильтруют через влажный бумажный фильтр. Фуксин Циля очень стойкий и достаточно хорошо сохраняется длительное время во флаконе темного стекла с притертой пробкой.

Вариант 2. К 10 мл насыщенного спиртового раствора основного фуксина приливают 90 мл 5% карболовой кислоты (карболовую кислоту вливают в краситель, но не наоборот). Смесь в течение нескольких минут энергично встряхивают, фильтруют через бумажный фильтр, а затем выливают во флакон для хранения. Этот краситель в чистом виде используется только для окраски кислотоустойчивых бактерий и спор.

Г. Фуксин спиртово-водный Пфейффера (раствор Пфейффера).

Карболовый фуксин Циля — 1 мл.

Вода дистиллированная — 9 мл.

К 1 части карболового фуксина Циля приливают 9 частей дистиллированной воды, в течение нескольких минут раствор необходимо энергично встряхивать. Раствор очень нестойкий, его необходимо готовить в небольших количествах непосредственно перед использованием. Оставлять можно не дольше следующего дня.

Метиленовый синий

А. Метиленовый синий — насыщенный спиртовый раствор.

Метиленовый синий — 8-9 г.

Спирт этиловый 96% — 100 мл.

Б. Метиленовый синий — спиртово-водный раствор.

1 мл насыщенного спиртового раствора метиленового синего разбавляют 30 мл дистиллированной воды.

В. Метиленовый синий по Леффлеру.

Насыщенный 8% спиртовый раствор метиленового синего — 30 мл. Дистиллированная вода — 100 мл.

1% раствор едкого калия (КОН) — 1 мл.

Насыщенный 8% раствор метиленового синего фильтруют через бумажный фильтр, прибавляют раствор едкого калия и разбавляют дистиллированной водой. Раствор красителя может храниться во флаконе в течение длительного времени, не изменяя свойств. При хранении его красящая способность, а также свойство давать метахроматическое окрашивание нуклеиновых соединений повышаются за счет образования азуров.

Г. Синька Нейссера.

Готовят отдельно два основных раствора.

Метиленовый синий — 0,1 г.

Этиловый спирт 96% — 2 мл.

Ледяная уксусная кислота — 5 мл.

Дистиллированная вода — 100 мл.

Кристаллический фиолетовый — 1 г.

Этиловый спирт 96% — 10 мл.

Дистиллированная вода — 300 мл.

Непосредственно перед окраской зерен волютина смешивают 2 части первого раствора с 1 частью второго раствора.

Толуидиновый синий — ацетат

Толуидиновый синий — 0,25 — 0,5 г.

Ледяная уксусная кислота — 2 мл.

Этиловый спирт 96% — 5 мл.

Дистиллированная вода — до 100 мл.

Хризоидин — водный раствор

Хризоидин в порошке — 1 г.

Дистиллированная вода — 150 мл.

В воронку на бумажный фильтр насыпают отвешенное количество краски, после чего вливают кипящую воду.

Везувин (коричневый краситель)

Везувин в порошке — 2 г.

Спирт этиловый 96% — 60 мл.

Дистиллированная вода — 40 мл.

Все ингредиенты смешать, нагреть до кипения на слабом огне и после остывания профильтровать через бумажный фильтр.

Сафранин

Вода дистиллированная — 100 мл.

Сафранин отвешивают в заданном количестве, ссыпают в воронку с бумажным фильтром и заливают кипящей водой.

Бриллиантового зеленого спиртовый раствор

Бриллиантовый зеленый — 0,5 г.

Этиловый спирт 96% — 100 мл.

Краска хранится длительное время во флаконе темного стека в темноте, закрытая стеклянной притертой или резиновой пробкой.

Краситель Романовского-Гимзы

Метиленовая синька (медиц.) — 1,563 г.

Метанол (ЧДА) — 750 мл.

Глицерин (ЧДА) — 256 мл.

Красящую смесь Романовского-Гимзы, которая имеет в основе краску Романовского-Райта, в виде порошка (коммерческий краситель) растворяют в смеси равных объемов метилового спирта и глицерина (800 мг красителя на 100 мл растворителя). Краситель растворяется плохо, поэтому лучше его растереть с растворителем в количестве 300 мг на 100 мл, а затем, помешивая, добавлять краситель до получения нужной концентрации.

Приготовление красителя иногда занимает несколько дней. Важно в качестве растворителей использовать химически чистый метиловый спирт и глицерин, так как примеси ухудшают свойства красителя. Вместо метилового спирта можно применять 95% этиловый спирт. Приготовленную красящую смесь хранят в сухом прохладном месте в плотно закрытом сосуде.

Краситель Романовского-Гимзы представляет собой смесь азура (органический краситель, получаемый из метиленового синего), эозина и метиленового синего. Продается в готовом виде. Непосредственно перед употреблением к 10 мл дистиллированной воды (pH 7,0-7,2) прибавляют 10 капель имеющегося в продаже красителя Романовского-Гимзы.

Тушь для окраски препаратов по Бурри

Тушь черная — 5 мл.

Дистиллированная вода — 15 мл.

К 1 объему черной туши прибавляют 3 объема дистиллированной воды. Разведенную тушь наливают в центрифужную пробирку и центрифугируют 15-20 минут при 2000-3000 об./мин для осаждения крупных частиц туши. Сливают надосадочный слой туши и стерилизуют в автоклаве при 0,5 атм. в течение 30 минут. Вместо стерилизации можно добавлять к туши несколько капель формалина. Подготовленную таким образом тушь выдерживают две недели, пока все крупные частицы не осядут на дно. Для приготовления препарата осторожно берут только верхнюю часть отстоявшейся жидкости.

Реактив Г. П. Калины

Раствор йодида калия 0,5% — 96 мл.

Спиртовый раствор основного фуксина 5% — 2 мл.

Спиртовый раствор йода 5% — 2 мл.

0,5% раствор йодида калия готовят, подогревая на водяной бане. После полного растворения навески йодида калия в 96% этиловом спирте последний соединяют с растворами фуксина и йода. Смесь хранят во флаконе темного стекла с притертой пробкой в холодильнике.

Раствор Люголя

Кристаллический йод — 1 г.

Йодид калия — 2 г.

Дистиллированная вода — 300 мл.

Йодид калия растворяют в 5-10 мл дистиллированной воды, затем прибавляют кристаллический йод, оставляют на несколько часов до полного его растворения и после этого приливают остальное количество воды.

Краситель Козлова (для выявления зернистых форм микобактерий туберкулеза)

Генцианвиолет — 1 г.

Фенол кристаллический — 6 г.

Глицерин — 40 мл.

Вода дистиллированная — 100 мл.

Генцианвиолет и фенол растирают в ступке, добавляя постепенно глицерин и дистиллированную воду. Перед употреблением основной раствор разводят 3 частями дистиллированной воды и фильтруют.

Краситель Раскиной для окраски зерен волютина

Карболовый фуксин Циля — 4 мл.

Метиленовый синий насыщенный — 4 мл.

Ледяная уксусная кислота — 5 мл.

Этиловый спирт 96% — 95 мл.

Вода дистиллированная — до 200 мл.

РАСТВОРЫ КРАСИТЕЛЕЙ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ КРАСЯЩИХ БУМАЖЕК

Кристаллический генциановый или метиловый фиолетовый для окраски по Граму

Кристаллический фиолетовый — 1 г.

Спирт этиловый 96% — 100 мл.

Фуксин (основной)

Спирт этиловый 96% — 100 мл.

Фуксин карболовый Циля

На 100 мл приготовленного красителя добавляют 1-2 мл глицерина.

Метиленовый синий

Метиленовый синий — 1 г.

Спирт этиловый 96% — 100 мл.

ПРИГОТОВЛЕНИЕ ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ОКРАШИВАНИЯ

Для приготовления препарата из микробов, выросших на жидкой среде, исследуемый материал берут из пробирки бактериологической петлей.

Необходимо обратить внимание на правильное положение рук: левой рукой держат пробирку с ростом микробов в мясопептонном бульоне (МПБ) и правой — бактериальную петлю.

1) предметное стекло;

2) пробирка с культурой бактерий, выросших в жидкой питательной среде;

3) бактериологическая петля или стерильная пастеровская пипетка;

1. Обжечь петлю в пламени спиртовки до покраснения.

2. Вытащить ватную пробку из пробирки правой рукой (мизинцем), обжечь ее края над пламенем спиртовки.

3. Внести петлю в пробирку с МПБ, охладить петлю о внутреннюю поверхность стекла, затем взять 1 каплю культуры.

4. Обжечь края пробирки и пробку, закрыть пробирку, поставить ее в штатив (не выпуская из правой руки петлю с материалом).

5. Обезжиренное, обожженное в пламени спиртовки и охлажденное предметное стекло взять большим и указательным пальцами в левую руку.

6. Бактериологической петлей материал нанести на стекло, равномерно растирая круговыми движениями по поверхности предметного стекла в виде круга диаметром 8-10 мм.

7. Петлю обжечь в пламени спиртовки до покраснения.

8. Препарат высушить на воздухе и затем фиксировать методом фламбирования или прогрева, трижды внося в пламя спиртовки, охладить.

Мазки должны содержать достаточно материала для исследования и не быть толстыми.

Приготовление препарата из микробной культуры, выросшей на плотной среде (мясопептонном агаре — МПА).

1) предметное стекло;

2) вода или изотонический раствор хлорида натрия;

3) пробирка/чашка с культурой бактерий, выросших на плотной питательной среде;

4) бактериологическая петля;

1. На обезжиренное предметное стекло нанести каплю воды или физиологического раствора.

2. С поверхности среды (обратить внимание на правильность положения пробирки с ростом культуры: скошенной поверхностью кверху), бактериологической петлей осторожно взять материал.

3. Обжечь края пробирки, закрыть пробкой, поставить в штатив, не выпуская из рук бактериологическую петлю с культурой.

4. Внести материал бактериологической петлей в каплю воды на предметном стекле, равномерно растереть, на стекле с обратной стороны обозначить овалом или квадратом место нанесения материала.

5. Высушить препарат на воздухе.

6. Излишек микробного материала на петле сжечь в пламени спиртовки.

7. Фиксировать препарат фламбированием, внося в пламя спиртовки трижды, охладить.

Приготовление препарата из клинического материала. Приготовление препарата из крови. На хорошо обезжиренное предметное стекло, ближе к одному из его концов, наносят каплю крови, прикасаясь узким концом стекла непосредственно к уколу на пальце. Второе шлифованное стекло, которое должно быть уже предметного, ставят на первое под углом 45° и подводят к капле крови до соприкосновения с ней. После того как кровь растечется по шлифованному краю, стеклом делают скользящее движение справа налево, равномерно распределяя кровь тонким слоем по всей поверхности стекла. Правильно приготовленный мазок имеет светло-розовую окраску и одинаковую толщину на всем своем протяжении.

Приготовление «толстой капли». На середину предметного стекла пастеровской пипеткой наносят каплю крови или прикладывают стекло непосредственно к капле крови, выступающей из пальца. Нанесенную на стекло кровь размазывают бактериологической петлей до размера 8-10 мм в диаметре. Стекло оставляют в горизонтальном положении до подсыхания крови. Кровь в «толстой капле» распределяется неравномерно, образуя неровный край.

Приготовление препарата из жидкого патологического материала (мочи, ликвора). Маленькую каплю исследуемой жидкости наносят на предметное стекло и круговыми движениями петли распределяют равномерным слоем в виде кружка диаметром 8-10 мм.

Приготовление препарата из вязкого материала (мокрота, гной). Мокроту или гной переносят на предметное стекло ближе к узкому краю, накрывают другим предметным стеклом. Стекла слегка придавливают друг к другу, в результате чего находящийся между ними материал раздавливается. После этого свободные концы стекол захватывают большим и указательным пальцами обеих рук и разводят в противоположные стороны так, чтобы при движении оба стекла плотно прилегали друг к другу.

Приготовление препарата из органов и тканей. При исследовании органа, имеющего рыхлую консистенцию, его поверхность прижигают накаленными браншами пинцета (для обеззараживания), делают по этому месту надрез и из глубины остроконечными ножницами вырезают небольшой кусочек ткани, который помещают между двумя предметными стеклами. Далее поступают так же, как при приготовлении мазка из гноя и мокроты.

Если ткань органа плотная, то из глубины разреза делают скальпелем соскоб. Полученный материал распределяют тонким слоем по поверхности стекла скальпелем или бактериальной петлей.

Для приготовления мазка-отпечатка: вырезанный из середины органа небольшой кусочек ткани захватывают пинцетом и прикладывают поверхностью среза к предметному стеклу несколько раз последовательно (ряд мазков — отпечатков).

Приготовление препарата из нативного ликвора. Нативный ликвор центрифугируют при 3000 об./мин 5-10 минут. Из осадка отбирают каплю ликвора и наносят на обезжиренное предметное стекло. Препарат высушивают на воздухе при комнатной температуре или в условиях термостата при 37°С.

ФИКСИРОВАНИЕ ПРЕПАРАТОВ

Фиксация необходима для инактивации бактерий и прикрепления (фиксации) их к стеклу, предотвращения аутолизиса клеток и улучшения восприятия красителя.

Способы фиксации препаратов делят на физические и химические. Физический способ основан на воздействии высокой температуры на микробную клетку, химический — на применении химических средств, вызывающих коагуляцию белков цитоплазмы.

Самым распространенным методом фиксации бактерий считается обработка жаром. Это осуществляется путем трехкратного проведения препарата мазком вверх над пламенем спиртовки или газовой горелки. Препарат может находиться в пламени спиртовки не более 3 секунд. Для проверки надежности фиксации свободную от мазка поверхность предметного стекла прикладывают к тыльной стороне левой кисти. При правильном фиксировании стекло должно быть горячим, но не вызывать ощущений ожога. После чего препараты из бактерий окрашиваются разными способами. Метод применим при работе с чистой культурой микробов. При фиксации жаром удовлетворительной остается форма тела бактерий, но размеры их сохраняются хуже вследствие сморщивания клеток. Что же касается клеточных включений и других структур, то жаром можно фиксировать волютиновые зерна и эндогенные споры (для грубого исследования). Фиксацию жаром нельзя применять для жгутиков, протоплазмы и ядра, препаратов крови и отпечатков органов.

Фиксация химическими веществами используется для выявления и дифференциации структурных элементов: жгутиков, протоплазмы, нуклеоида, оболочки, при работе со смешанным материалом (кровь, отпечатки органов, соскобы со слизистых, гной, мокрота).

В качестве фиксаторов применяют:

• метиловый спирт (фиксируют 5 минут);

• этиловый спирт 96% (фиксируют 10-20 минут);

• смесь Никифорова: равные объемы спирта и эфира (фиксируют 10-20 минут);

• спирт — формол: смесь 5мл неразведенного формалина и 96% этилового спирта — 95 мл (фиксируют 15 минут);

• жидкость Буэна (Во uin , 1898): неразбавленный формалин 10 мл; ледяная уксусная кислота 2 мл, насыщенный водный раствор пикриновой кислоты 30 мл (фиксируют 5-10 минут);

• ацетон (фиксируют 5 минут);

• жидкость Карнуа (Ка rn оу) — ледяная уксусная кислота 10 мл, хлороформ 30 мл и 96% спирт 60 мл (фиксируют 10-15 минут). Жидкость Карнуа — прекрасный фиксатор, в особенности для изучения тонкого строения бактерий. Жидкость Карнуа нельзя применять для фиксации мазков крови и отпечатков внутренних органов, так как она вызывает полный гемолиз эритроцитов.

Существует два метода химической фиксации мазков:

1. Предметное стекло с высушенным мазком погружают в банку с фиксатором, высушивают на воздухе и микроскопируют.

2. На горизонтально установленные предметные стекла с мазками наносят по капле фиксатор и дают высохнуть.

Время фиксации зависит от применяемых в качестве фиксаторов веществ.

Биологическая библиотека — материалы для студентов, учителей, учеников и их родителей.

Наш сайт не претендует на авторство размещенных материалов. Мы только конвертируем в удобный формат материалы, которые находятся в открытом доступе и присланные нашими посетителями.

Если вы являетесь обладателем авторского права на любой размещенный у нас материал и намерены удалить его или получить ссылки на место коммерческого размещения материалов, обратитесь для согласования к администратору сайта.

Разрешается копировать материалы с обязательной гипертекстовой ссылкой на сайт, будьте благодарными мы затратили много усилий чтобы привести информацию в удобный вид.

© 2018-2021 Все права на дизайн сайта принадлежат С.Є.А.

Источник